Panorama des mesures accessibles sur le plateau technique SpICy

Le lecteur de plaque est un instrument commercial SAFAS qui permet de faire des mesures d’absorbance, de fluorescence, ou de luminescence en mode cinétique ou spectral. Cet instrument dispose d’une régulation de la température et d’une fonction d’agitation des échantillons et offre également la possibilité de travailler en cuve spectroscopique.

Lecteur de plaque SAFAS et exemple de cinétique.

LOLITA est un montage qui permet l’acquisition de déclins d’émission de fluorescence de haute qualité statistique et temporelle dans la gamme 0,1-100 ns sur des solutions ou poudre/solide. La source d’excitation est un laser blanc (440 -650 nm) et des LED dans l’UV. Des polariseurs sur le trajet optique du montage permettent l’enregistrement de déclin d’anisotropie de fluorescence pour accéder notamment au volume hydrodynamique de l’espèce émissive ou à des informations sur le caractère oligomérique d’une protéine fluorescente.

Montage LOLITA et déclin d’émission de fluorescence de protéines fluorescentes jaunes, en gris, l’IRF.

BEAM est un montage qui permet des irradiations contrôlées (en temps et en puissance), le déclenchement et l’analyse de photo-réactions (acquisition des spectres d’absorption et d’émission de fluorescence de façon simultanée (210-700 nm) suivi cinétique). Actuellement utilisé pour étudier les photo-réactions des protéines fluorescentes, il est ouvert à d’autres objets d’étude.

Montage BEAM et exemples de suivi cinétique des spectres d’absorption et d’émission de fluorescence d’une protéine fluorescente jaune sous irradiation.

FloRa est un microscope plein champ qui permet de faire de l’imagerie dynamique multicouleur ou ratiométrique.

• • • • • • • • 2 objectifs ; x63 , x40
              • régulation à 37°C possible
              • source LED : 380-680 nm
              • 6 sélections spectrales de fluorescence disponibles

Microscope FLORA et exemple de l’étude de nouvelles sondes fluorescentes pour la détection de H2O2 en collaboration avec l’ICSN et l’ICMMO.

BiFluor permet de faire sur le même instrument des mesures d’intensité de fluorescence, de durée de vie de fluorescence en mode image (FLIM) et des mesures de spectres d’émission de fluorescence sous microscope (cellules en culture, poudre, solution ou film).

• • • • • • • • 2 objectifs ; x60, x20
              • régulation en température possible 15-40°C
              • source LED pour les mesures d’intensité 380-680 nm
              • diodes pulsées 440 nm & 466nm pour les mesures de durée de vie
              • détection PicoQuant, logiciel SymPhoTime64

Microscope BIFLUOR et exemple de mesures FLIM à gauche et de déclins d’émission de fluorescence sur des films à droite.

Sous la responsabilité d’Hadrien Jalaber, la plateforme SpICy est équipé d’un Cytoflex, un cytomètre multicouleur Beckman Coulter, avec 3 Lasers d’excitation (405, 488, 561nm) et disposant de plus de 10 paramètres optiques en détection. Il peut détecter des objets de 1 à 100 µm. Une station d’analyse avec le logiciel FloJoW est disponible. Une stratégie d’analyse de FRET par cytométrie (CytoFRET) est en cours de développement. Cet équipement est situé à proximité de la salle de culture cellulaire et de nombreux équipements de laboratoire.

Les utilisateurs peuvent utiliser le cytometre soit avec l’aide d’un ingénieur de plateforme soit en autonomie après avoir suivi une formation. Les utilisateurs extérieurs au laboratoire participent aux coûts d’entretien et de fonctionnement du cytomètre.

Cytomètre multicouleur de Beckman Coulter, schéma de fonctionnement et exemple de mesure.